基于CRISPR/Cas9系統(tǒng),通過單載體集成多sgRNA,實現(xiàn)Cas9蛋白對多個目標位點的識別,誘導(dǎo)雙鏈斷裂 (DSB),從而引入插入/缺失突變(Indels),實現(xiàn)多基因敲除。


(1)功能基因研究:支持同源基因功能冗余,基因上下游調(diào)控研究;
(2)作物改良:快速高效對多個性狀進行同時改良,加速性狀創(chuàng)制。

(1)多靶點靈活編輯:單載體最多可集成20個sgRNA靶點,靈活支持“一敲多”(單sgRNA靶向多基因)、“多敲一”(多sgRNA靶向單基因)及“多敲多”(多sgRNA靶向多基因)的編輯模式,適配復(fù)雜基因調(diào)控需求;
(2)高效率編輯系統(tǒng):采用不同snRNA啟動子(如OsU6、AtU6),驅(qū)動多sgRNA獨立高效表達,規(guī)避載體重組風(fēng)險,提升編輯效率。針對物種不同,進行Cas9密碼子優(yōu)化,提升蛋白表達水平,水稻編輯效率穩(wěn)定≥90%;
(3)高效載體組裝技術(shù):結(jié)合Golden Gate/Gibson無縫克隆技術(shù),實現(xiàn)sgRNA模塊化組裝;
(4)多物種兼容性:覆蓋水稻、擬南芥、玉米、大豆等作物,支持定制化載體設(shè)計。

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